單克隆抗體怎么制備？有哪些功能？
瀏覽次數：824發布日期：2019-08-09
單克隆抗體的分類：
以細胞融合為基礎的鼠雜交瘤技術的發展，使得人們能夠大量獲取高親和性和強特異性的鼠單克隆抗體(McAb)，McAb在理論和實踐上的應用成為解決生物學和醫學等許多重大問題的重要手段。但是鼠源性單抗應用于人類的臨床應用結果反映出了單克隆抗體藥物存在的一些問題：
鼠源性單抗容易容易產生人抗鼠抗體(HAMA) ,在體內作為異源蛋白被清除掉，從而削弱其治療的有效性。
鼠源性單抗在人體內生物活性降低，其Fc段不能有效激活人體FcRn及補體系統的效應功能。
鼠源性單抗在人體內的半衰期短，因而降低了其療效。
因此，人們一直致力于人源性抗體的研究，鼠抗體人源化就是通過基因改造，使其和人體內的抗體分子具有極其相似的輪廓，從而逃避人免疫系統的識別，避免誘導HAMA（人抗鼠抗體）反應。進行抗體的人源化有兩個基本原則：保持或提高抗體的親和力和特異性；大大降低或基本消除抗體的免疫原性。人源化有多種方案，都必須遵循這兩個原則，尤其不能喪失抗體特異結合的能力。
抗體的結構與功能
1、抗原：進入動物體內對肌體的免疫系統產生刺激作用的外源物質。
包括：蛋白質、多糖、核酸、病毒、細菌、各種細胞等。
特點：外源性、結構性（分子表面具有穩定的環狀結構基團作為識別位點）、特異性（抗原與抗體的反應）。
2抗體
動物免疫系統分泌的中和或消除抗原物質的影響的糖蛋白，存在于血清中，本質是免疫球蛋白（Immuniglobulin,Ig）。
動物脾臟有上百萬個B淋巴 細胞，一個細胞就是一個克隆，它針對抗原上的一個抗原決定族產生的抗體是單克隆抗體。
一種抗原通常具有多個不同的抗原決定族，因此能刺激多個B淋巴細胞產生相應的單克隆抗體，因此血清中的抗體是針對不同抗原決定族的單克隆抗體混合物，稱為多克隆抗體。
動物免疫與親本細胞的選擇
細胞融合：淋巴細胞雜交瘤的制備
雜交瘤細胞的篩選：有限稀釋法等
單克隆抗體的制備和凍存
單克隆抗體的純化
親本細胞的選擇
骨髓瘤細胞：一般不分泌抗體，能在體外無限繁殖和連續繼代培養，且為HPRT－（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶）或TK－（胸腺嘧啶核苷激酶） 。多用BALB/C 小鼠的骨髓瘤細胞。[小鼠骨髓瘤細胞能在體外無限增殖傳代并不分泌抗體。腫瘤細胞DNA生物合成有兩條途徑：一條由糖、氨基酸合成核苷酸，進而合成DNA，這是主要途徑。這條途徑可被葉酸的拮抗物—氨基喋呤(A)所阻斷(但如果培養基中含核苷酸“前體“次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷，即便有A存在，細胞通過另一途徑(稱替代途徑或應急途徑)也可合成核苷酸。但后一途徑需次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶 (TK)存在)。]
淋巴細胞：經過免疫處理的淋巴細胞，多用大鼠或小鼠。
免疫方法：對細胞或微生物抗原可直接注射如小鼠體內，可溶性蛋白抗原可與等量的福氏*佐劑混合乳化后，注入到動物體內。
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