以下這些就是PCR檢測試劑盒的實驗?zāi)康暮驮?/div>
瀏覽次數(shù)：1135發(fā)布日期：2020-07-17
PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因（DNA）片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的（1+E）n（0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
技術(shù)特點：
1、PCR試劑盒準(zhǔn)確可靠，臨床雙盲對照試驗＞1000例，結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)測序法比對，結(jié)果*性大于99%。
2、高靈敏：可檢測低至10ng的人基因組DNA。
3、快速：整個檢測流程只需3小時。
4、簡便：試劑盒提供預(yù)混好的試劑，使體系配置操作簡便。
5、防污染
6、產(chǎn)品僅用于科研高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性引物與DNA互補鏈結(jié)合必需*配對，才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產(chǎn)物配對，在延伸中產(chǎn)生熒光。
PCR檢測試劑盒的實驗?zāi)康模?/div>
1、掌握PCR法擴(kuò)增目的基因片段的基本原理與方法；
2、通過PCR驗證目的基因片段是否插入質(zhì)粒中；
3、充分理解本學(xué)期三次分子實驗的原理、聯(lián)系與意義。
實驗原理：
分子生物學(xué)實驗技術(shù)基本原理：
PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。是一項DNA體外合成放大技術(shù)，能快速特異地在體外擴(kuò)增一定長度的DNA片段。可用于基因分離克隆，序列分析，基因表達(dá)調(diào)控，基因多態(tài)性研究等許多方面。
在高溫（94℃）下，待擴(kuò)增的靶DNA雙鏈?zhǔn)軣嶙冃猿蔀閮蓷l單鏈DNA模板；而后在低溫（37～55℃）情況下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈DNA模板結(jié)合，形成部分雙鏈；在普通Taq酶的Zui適溫度（72℃）下，以引物3’端為合成的起點，以d NTP為原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新鏈。這樣，每一雙鏈的DNA模板，經(jīng)過一次解鏈、退火、延伸三個步驟的熱循環(huán)后就成了兩條雙鏈DNA分子。如此反復(fù)進(jìn)行，每一次循環(huán)所產(chǎn)生的DNA均能成為下一次循環(huán)的模板，每一次循環(huán)都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區(qū)拷貝數(shù)擴(kuò)增一倍，PCR產(chǎn)物得以2n的形式迅速擴(kuò)增，經(jīng)過25～30個循環(huán)后，理論上可使基因擴(kuò)增10 倍以上。
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