用LAMP鑒定試劑盒進行試驗時，什么事項該注意？
瀏覽次數：822發布日期：2020-08-20
LAMP鑒定試劑盒引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。
聚合酶鏈式反應(PCR)是體外酶促合成特異DNA段的一種方法,由高溫變性、低溫退火(復性)及適溫延伸等幾步反應組成一個周期,循環進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結合...”
LAMP鑒定試劑盒具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增巴戟天，與其他植物沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
LAMP鑒定試劑盒用途：
1. 方便，用戶只需準備模板和引物既可以進行PCR 實驗。
2. 快捷，操作步驟已經限度地簡化，能減少污染，降低實驗誤差。
3. 本產品A 型含電泳染料，PCR 反應液可直接上樣電泳，進一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經過精心優化，反應的靈敏度高，特異性強。能擴增各種常見的DNA 樣品。
5. 產物可直接用于T 載體克隆，不需要額外的加A 反應。
使用及效果：將本產品15 μL 與用戶自備的模板，引物和水共15 μL 混合后，直接進行PCR反(PCR 參數由用戶自己確定)，反應結束后直接取10 μL 電泳檢查擴增結果。
LAMP鑒定試劑盒使用注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
實驗注意事項：
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
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