
ELISA試劑盒是一種用于檢測生物樣品中特定蛋白質或抗體的工具,通過酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)實現。這種技術利用抗原抗體反應的特異性來識別和定量目標分子。
ELISA試劑盒檢測的基本原理:
ELISA基于抗原與抗體特異性結合的原理,通過酶標記的抗體或抗原與固相載體上的目標分子結合,然后通過酶催化底物顯色反應,根據顏色變化來定量檢測目標分子。

要鑒別ELISA試劑盒是否檢測目的抗原,可以采用干擾實驗或交叉實驗方法:
一、干擾實驗:
ELISA試劑盒是否檢測目的抗原可以通過干擾實驗來驗證。
具體步驟如下:
1. 準備干擾液:將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原與試劑盒中的檢測抗體按照1:2的比例混合,配置成抗體-抗原混合液。
2. 替代檢測抗體:將上述干擾液替換掉原試劑盒中的檢測抗體,確保混合后的溶液能夠充分孵育。
3. 操作步驟:將步驟2中的溶液在37°C下孵育15分鐘,之后按照試劑盒說明書進行后續的實驗操作,包括加酶復合物和底物。
結果分析:
1)、如果標準曲線良好,說明加入的目的抗原與試劑盒抗體不匹配,試劑盒檢測抗體針對的是非目的抗原,表明該試劑盒可能為偽劣或假造。
2)、如果標準曲線無線性,說明試劑盒檢測抗體已被目的抗原中和或干擾,影響了其實際檢測作用,這表明該試劑盒檢測抗體針對的是目的抗原。
通過這種干擾實驗,可以有效辨別ELISA試劑盒是否正確地檢測了目的抗原。此外,如果購買了同一公司生產的兩個不同ELISA試劑盒(如A和B),也可以通過交叉實驗進行驗證,確保它們檢測的不是相同的指標。
二、交叉實驗(適用于同一公司不同試劑盒):
步驟:
1. 取出購買的試劑盒A的包被板兩條。
2. 一條包被板加試劑盒A的標準品做標準曲線。
3. 另一條包被板加試劑盒B的標準品做標準曲線。
4. 后續操作:按照試劑盒說明書進行,加檢測抗體、酶復合物和底物,檢測兩條標準曲線。
結果分析:
如果兩條標準曲線一致,說明兩個ELISA試劑盒檢測的是同一個指標而非A和B,可能為偽劣假造ELISA。