分享8種常用的微生物菌種保存方法！
瀏覽次數(shù)：397發(fā)布日期：2022-07-26
微生物菌種分飼料發(fā)酵菌種和生物肥發(fā)酵菌種。該產(chǎn)品不但可以彌補常規(guī)飼料中容易缺乏的氨基酸，而且能使其它粗飼料原料營養(yǎng)成份迅速轉(zhuǎn)化，達(dá)到增強消化吸收利用效果。下面介紹幾種常見的保存方法！
幾種常用的微生物菌種保存方法，如下：
1、常規(guī)保存法：
該法操作簡單，只需普通冰箱保存，每個臨床微生物實驗室均可采用。但缺點是留存時間短，傳代頻繁，菌種易變異。
2、半固體穿刺保存法：
用穿刺接種法將細(xì)菌培養(yǎng)物接種于半固體培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)37℃18-24h培養(yǎng)后，加一層無菌的液體石蠟，厚度約為1cm，置冰箱保存。腸道桿菌及葡萄球菌等，一般可保存3-6個月。當(dāng)需傳代移種時，將半固體菌種管傾斜使液體石蠟流至一邊，再取菌移種于新的培養(yǎng)基。將沾有少量液體石蠟的接種環(huán)浸于95％酒精中片刻，再燒灼滅菌以免直接在酒精燈上燒灼時，液體石蠟四處濺散而引起污染。如保存副溶血性弧菌可加入NaCl制成3.5%高鹽半固體，在室溫下可保存1個月。
3、砂土管保存法：
適用于產(chǎn)芽孢的細(xì)菌，將過篩后的中性細(xì)砂烘干，裝入小試管內(nèi)約lcm高，塞以棉塞，滅菌烘干備用。用無菌生理鹽水洗下培養(yǎng)基上的細(xì)菌培養(yǎng)物，制成菌懸液。然后吸此菌懸液約0.5ml注入砂土管內(nèi)，以砂土全部浸濕為度。塞好棉塞，放入干燥器內(nèi)抽干。然后放在裝有氯化鈣(吸水劑)的干燥瓶內(nèi)，置冰箱保存?zhèn)溆谩Ｐ栌脮r可取一接種環(huán)砂土接種于適宜培養(yǎng)基上培養(yǎng)即可。
4、低溫冷凍保存法：
實驗室必須配備-20℃以下低溫冰箱，冰箱溫度越低，保存的時間越長。
5、濾紙片低溫冷凍保存菌種方法：
將新華濾紙片剪成3mm×3mm，經(jīng)高壓蒸汽滅菌置無菌器皿中備用，0.5ml無菌帶蓋塑料離心管。將待保存菌種在血平板上分離純化后，用無菌小鑷子夾住濾紙片，在平板上刮取多量細(xì)菌，放在塑料離心管內(nèi)，1只離心管中可放數(shù)十片帶菌濾紙片，然后蓋上蓋子，用膠布將蓋口封嚴(yán)，注明患者姓名，菌名及保存日期等以備查找。將塑料管放在-70℃冰箱內(nèi)保存。使用時將菌種分別從塑料離心管中取出1片，放入增菌肉湯中，35℃孵育18～24ｈ，再將菌懸液移種于血平板上。本方法適于保存對營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌，而不適于苛養(yǎng)菌的保存。
6、細(xì)菌鑒定卡保存菌種：
本法適用于使用VITEK全自動微生鑒定儀的實驗室。方法是將鑒定卡標(biāo)注后直接放置-20℃冰箱保存，復(fù)蘇時將鑒定卡直接從-20℃移至35℃，待小孔液體*融化后，以無菌手續(xù)，用注射器抽吸出陽性生長孔內(nèi)的液體，點種于合適平板，置35℃孵箱內(nèi)24～48小時即可。該法生化卡內(nèi)的細(xì)菌反復(fù)凍融5次，分離出的細(xì)菌效果相同。葡萄球菌屬、腸桿菌屬、念珠菌屬存活時間不小于29個月；腸球菌屬、黃桿菌屬、不動桿菌屬存活時間不小于21個月，鏈球菌屬和假單胞菌屬存活時間不小于10個月。
7、商品化菌種保存管：
每只保藏管中含20-25個小珠以及緩沖液，使用時將菌落挑入緩沖液中，混勻，將緩沖液吸去，置-70℃冰箱保存可達(dá)10年，-20℃冰箱可保存1-3年。復(fù)蘇時，只需將小珠接入肉湯或平板上滾動即可。商品化菌種保存管操作簡單，但價格偏高。筆者預(yù)計隨著經(jīng)濟的不斷發(fā)展和實驗室條件的改善，使用的單位將會越來越多。
8、冷凍真空干燥保存法：
該法是目前保存菌種的最佳方法，具有如下幾個突出的優(yōu)點：
①適用范圍廣。除少數(shù)不產(chǎn)生孢子只產(chǎn)生菌絲體的絲狀真菌不宜采用此方法保藏外，其他各大類微生物如細(xì)菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌及病毒均可采用此方法保藏；
②保藏期長，成活率高。有人報道保藏在真空冷凍干燥安培管中的真菌成活期長達(dá)40多年，一般微生物至少可保存10余年；
③微生物在保藏期內(nèi)可避免其它雜菌污染；
④便于攜帶運輸，易實現(xiàn)商品化。其缺點為需要一定的設(shè)備、操作繁瑣等。菌種管由傳統(tǒng)的玻璃菌種管改為0.5ml帶蓋塑料離心管。
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