分享！植物直接PCR試劑盒的操作方法
瀏覽次數：347發布日期：2022-09-25
植物直接PCR試劑盒是一款可直接對不同類型植物葉片進行PCR擴增的試劑盒，適應性廣、穩定性強。該試劑盒采用*的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種植物樣品并釋放出基因組DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代謝產物等，即可將釋放出的基因組DNA作為模板直接用于PCR反應。此外，樣品使用量少，低至1 mm植物葉片即可進行實驗。
本試劑盒中提供的2×Plant Master Mix具有很強的擴增兼容性，能直接以待測樣品裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑為2倍濃縮PCR反應混合液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。
該試劑盒可用于轉基因植株鑒定、植物基因分型等。
植物直接PCR試劑盒的操作方法：
植物葉片：
1、研磨裂解法：
①研磨儀破碎：將直徑5mm左右的葉片置于50μL Buffer P1中，用研磨儀加鋼珠（鋼珠直徑3mm左右，共2個）破碎葉片（45Hz，1min），葉片破碎后溶液呈現綠色，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1μL用于PCR擴增。
②槍頭搗碎：推薦使用幼嫩葉片。將直徑5mm左右的葉片置于50μL Buffer P1中，用槍頭將葉片搗碎，搗碎后溶液呈現綠色，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1μL用于PCR擴增。
2、加熱裂解法：推薦使用幼嫩葉片。將直徑5mm左右的葉片置于50μL Buffer P1中，95℃加熱5-10min（確保裂解液*浸沒葉片），較難裂解的葉片（老葉片）可適當延長時間（10-20min），加熱裂解后溶液呈現綠色，震蕩混勻，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1μL用于PCR擴增。
3、直接法：推薦使用幼嫩葉片。使用打孔器或者刀，將直徑1mm左右的葉片直接加入到PCR反應體系中；復雜樣本或者是長片段的擴增，推薦使用直徑<1mm的葉片。
在線咨詢