分享!植物ELISA試劑盒的使用優點和實驗操作步驟
瀏覽次數:414發布日期:2023-01-28
植物ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被植物白介素1α(IL-1α)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物白介素1α(IL-1α)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
植物ELISA試劑盒的五大優點:
1、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;
2、吸附性能好,空白值低。孔底透明度高的固相載體;
3、穩定的重復性和可靠;
4、高效、靈敏、特異的抗體;
5、較大限度的節省實驗經費。
植物ELISA試劑盒的實驗操作步驟:
1、把試劑混勻,切記實驗時不要加理大量含有泡沫的液體,避免實驗產生誤差。
2、跟數據測樣決定板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔 加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7、每孔加入底物各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。一定要避免光照。
8、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9、在450nm波長處測定各孔的OD值。