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　　鑒定試劑盒引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。

 

　　鑒定試劑盒設計引物應遵循以下原則：

　　1、引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。

　　2、引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

　　3、引物堿基：G C含量以40-60%為宜，G C太少擴增效果不佳，G C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

　　4、避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。

　　5、引物3'端的堿基，特別是zui末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

　　6、引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

　　7、引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

　　引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以zui低引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。