關于單克隆抗體的制備過程，我們已為您整理好了
瀏覽次數：495發布日期：2021-08-26
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。
用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，可制備針對一種抗原表位的特異性抗體，即單克隆抗體。
單克隆抗體的制備過程：
1、免疫動物：
免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。
2、細胞融合：
采用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。
3、選擇性培養：
選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般采用HAT選擇性培養基。在HAT培養基中，未融合的小鼠骨髓瘤細胞中DNA的從頭合成途徑會被阻止；未融合的骨髓瘤細胞又因缺乏Hypoxanthine-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶(HGPRT)，不能利用補救途徑合成DNA；這樣未融合小鼠骨髓瘤細胞的兩個DNA合成途徑都被阻止，骨髓瘤細胞DNA不能復制而死亡。未融合的B淋巴細胞雖具有Hypoxanthine-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細胞由于從B淋巴細胞獲得了Hypoxanthine-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，可以通過補救途徑合成DNA，并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此，雜交瘤細胞能在HAT培養基中存活和增殖。
4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化：
在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。采用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，并進行克隆擴增。經過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量后，及時進行凍存。
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