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【適用儀器】

適用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自動熒光PCR 檢測儀。

【檢測原理】

pFMV35S基因檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）本試劑盒根據熒光 PCR 技術原理，針對 PCR試劑盒設計特異性引物和 Taqman 探針，通過熒光 PCR 檢測儀進行檢測，從而實現對 PCR試劑盒的檢測。

服務流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
【儲存條件及有效期】

1．避光-20℃儲存，有效期 12 個月。
2．低溫運輸不能超過 4 天；開封后避光-20℃儲存，對有效期沒有影響。避免反復凍融，凍融 6 次不影響檢測效果。

3．生產日期、有效期至：見外包裝盒。

【樣本要求】

1．樣本種類：鼻/、痰液、支氣管肺泡灌洗液；培養物等樣品。
2．保存條件：采集的標本應及時送檢，24 小時內檢測的應 4℃保存，超過 24 小時的最好-70℃保存，并避免反復凍融。
3.步驟:②中 55℃時熒光檢測，檢測通道為 FAM。*ABI 系列熒光 PCR 儀不選 ROX 校正，淬滅基團選 None。
4 ． 結果分析根據分析后圖像調節起止值，（建議起始設在 3～15、終止設在 5～20，同時調整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊分析，在報告界面查看結果。

【結果判讀】

1．FAM 通道檢測。

2．陰性：Ct 值＞38 或未檢出。

3．陽性：擴增曲線呈 S 型，且 Ct 值≤35。

4．可疑：擴增曲線呈 S 型，且 35＜Ct 值≤38，需復檢；復檢結果若一致，判定結果為陽性。
【檢驗方法的局限性】
1．樣品采集、運輸、保存不當，試劑運輸、保存、配置不當都可能會影響實驗結果，甚至會導致假陰性結果。

2．如果實驗室污染、試劑污染、樣品交叉污染，可能出現假陽性結果。
【質量控制】

1．陰性對照：Ct 值＞38 或未檢出。

2．陽性對照：擴增曲線呈 S 型，且 Ct 值≤30。

3．同一實驗以上要求需同時滿足，否則本次實驗視為無效。

4．每種檢測靶標都需設陰陽對照，不同的靶標根據對應陰性調整基線閾值。

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