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測定意義：                           

土壤總磷包括有機磷和無機磷，其中無機磷能夠直接被植物利用。土壤有機磷經過礦化分解而轉化為無機磷。同時測定土壤總磷、有機磷和無機磷，可以全面反映土壤磷營養狀況。

測定原理：

利用鉬藍法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機磷含量；另外取一份土樣，經高溫灼燒后，土壤有機磷轉化為無機磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機磷含量，即可計算出有機磷含量。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、可調式水浴鍋，分析天平、可調式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100目篩子（可更小）。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋10倍后再用。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入8mL蒸餾水，充分溶解后加入4mL試劑二，混勻。

標準品：液體×1支，20 μmol/L無機磷標準品，4℃保存。

土壤不同形態磷提取：

1.無機磷：稱取通過100目篩子的風干土樣0.01g，轉移到1mL離心管，加入1mL試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液一，用于無機磷含量測定。

2.總磷提取：取通過100目篩子的風干土樣，550℃灼燒1h，冷卻后稱取約0.01g，轉移到1 mL離心管，加入1mL試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液二，用于總磷含量測定。

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節波長到660 nm，蒸餾水調零。

2.打開水浴鍋，調節溫度到40℃。

3. 空白管：取EP管，依次加入100μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，依次加入10μL標準液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 測定管：取EP管，依次加入10μL上清液一或者上清液二，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

土壤磷含量計算：

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1. 土壤無機磷含量（μmol /g 干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W

                          =0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W

C標準液：20 μmol/L； W：土壤樣品質量，g； V總：上清液一總體積，1 mL=0.001 L。

2. 土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W

                        =0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W

C標準液：20 μmol/L；W：土壤樣品質量，g；V總：上清液二總體積，1mL=0.001 L。

3. 土壤有機磷（μmol /g干重）=土壤總磷-土壤無機磷

b. 使用96孔板測定的計算公式如下

1.土壤無機磷含量（μmol /g 干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W

                          =0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W

C標準液：20 μmol/L； W：土壤樣品質量，g； V總：上清液一總體積，1 mL=0.001 L。2. 土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C標準液×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×V總÷W

                        =0.02×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)÷W

C標準液：20 μmol/L；W：土壤樣品質量，g；V總：上清液二總體積，1mL=0.001 L。

3．土壤有機磷（μmol /g 干重）=土壤總磷-土壤無機磷

注意事項：

試劑三配制過程中，可能會產生黑色固體，其不影響結果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。

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