
貼壁細胞在體外培養(yǎng)時需附著于底物表面生長,這一過程依賴細胞分泌細胞外基質并與其表面黏附因子結合。當細胞健康、狀態(tài)良好時,它們會充分伸展,呈現扁平或有突起的形態(tài);反之,若受到損傷或環(huán)境壓力,細胞常收縮為圓形,貼附力減弱甚至脫落。
以下因素可導致細胞形態(tài)改變,進而影響其貼壁能力:
常見原因與對應形態(tài)變化
影響因素 | 細胞形態(tài)變化 | 對貼壁能力的影響 |
胰酶消化不當 | 細胞變圓、立體感弱、易成團 | 消化過度損傷膜蛋白,導致貼壁不牢 |
細胞老化或傳代過多 | 細胞拉長、顆粒增多、偽足變多且長 | 貼壁能力下降,難消化也易脫落 |
藥物或化合物處理 | 如丹酚酸B模型中,岡田酸使SH-SY5Y細胞神經突縮短、消失、變圓 | 細胞貼壁能力減弱 |
污染(支原體/細菌等) | 背景臟、細胞輪廓模糊、生長緩慢 | 代謝異常導致貼附性降低 |
血清質量差或缺乏貼壁因子 | 細胞難以鋪展,保持圓形 | 分泌細胞外基質能力下降 |
激活或分化(如BV2小膠質細胞) | 由靜息態(tài)的細長形變?yōu)榘⒚装蜆樱w增大、突起縮短 | 可能伴隨貼附方式改變,部分漂浮 |
物理操作干擾(頻繁晃動、PBS沖洗) | 短時間內細胞回縮、變圓 | 易造成本已脆弱的細胞脫壁 |
細胞骨架是連接形態(tài)與貼壁的關鍵結構。微絲(肌動蛋白)、微管和中間纖維共同維持細胞形狀,并通過黏附斑(focal adhesion)將細胞錨定在基質上。一旦骨架重組受阻或破壞(如藥物作用),細胞即失去張力,無法維持伸展狀態(tài),從而削弱貼附。
解決建議
1、控制消化時間:顯微鏡下觀察細胞回縮變圓、少量脫落時即終止消化
2、優(yōu)化培養(yǎng)條件:使用高質量血清、新鮮配制培養(yǎng)基、避免pH偏堿(紫紅色提示NaHCO?分解)。
3、促進貼壁措施:
使用多聚賴氨酸、纖連蛋白或膠原包被培養(yǎng)器皿;
復蘇初期提高血清濃度(如增至15–20%)幫助恢復;
傳代后24小時內避免移動或觀察,給予充分貼壁時間。
4、定期檢測污染:尤其是支原體,因其常無明顯渾濁但嚴重影響細胞狀態(tài)。
結論
細胞形態(tài)是判斷其貼壁狀態(tài)的重要視覺指標——正常伸展 = 良好貼附,普遍變圓或收縮 = 貼壁受損。通過規(guī)范操作、優(yōu)化環(huán)境和及時干預,可有效維持細胞形態(tài)穩(wěn)定,保障實驗順利進行。