UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細胞
UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細胞
名稱 | UMNSAH/DF-1 (雞胚成纖維細胞) |
別稱 | UMNSAH-DF-1; UMNSAH-DF 1; UMNSAH-DF1; UMNSAH/DF#1; DF-1; DF1; Douglas Foster-1 |
種屬 | 雞 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
生長培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：39℃（Max.40℃，Min.38℃） |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
注意事項 | 1、該細胞培養(yǎng)難度較高，溫度波動會導(dǎo)致細胞空泡增多； 2、該細胞為38℃~40℃培養(yǎng)，理想培養(yǎng)溫度為39℃，37℃培養(yǎng)會影響細胞狀態(tài)，建議提前準備專用培養(yǎng)箱； 3、受溫度波動影響，收貨常見細胞空泡較多，穩(wěn)定培養(yǎng)后可恢復(fù)。 |
背景描述 | UMNSAH/DF-1細胞是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞細胞株，自發(fā)永生化。分離原代雞胚成纖維細胞并在培養(yǎng)液中培養(yǎng)，傳代直到衰老；在衰老過程中離心以保持細胞培養(yǎng)在30%到60%滿；不衰老的克隆進行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒有觀察到克隆增殖，說明UMNSAH/DF-1細胞是永生化而沒有轉(zhuǎn)化。UMNSAH/DF-1細胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達和重組病毒生產(chǎn)的基質(zhì)。 |
年齡（性別） | 10日齡 |
組織來源 | 胚胎，自發(fā)永生化 |
細胞類型 | 自發(fā)永生化細胞 |
生物安全等級 | 1 |
倍增時間 | ~22-36 hours |
致瘤性 | No, in immunosuppressed mice.No, in semisolid medium. |
保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-12203 |
二、細胞培養(yǎng)操作
1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代。
9. 注意： 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。
公司正在出售的產(chǎn)品：
M-AChR ELISA Kit | 山羊分枝桿菌PCR試劑盒 |
Tight Junction Protein 1(TJP1)ELISA Kit | 液化沙雷菌PCR試劑盒 |
ai lupus aicoagula aibody(IgG)ELISA Kit | 豬圓環(huán)病毒通用PCR檢測試劑盒 |
TRH ELISA Kit | 錦鯉皰疹病毒PCR檢測試劑盒 |
PGF2α ELISA Kit | 蓋塔病毒RT-PCRPCR試劑盒 |
ai-IgA aibody ELISA Kit | 同禽腺病毒1型)鵪鶉支氣管炎病毒PCR試劑盒 |
OX-B ELISA Kit | 細粒棘球絳蟲PCR試劑盒 |
Transgelin 3(TAGLN3)ELISA Kit | 弗氏檸檬suan桿菌PCR檢測試劑盒 |
ai-MCV Ab ELISA Kit | 福賽斯坦納菌PCR檢測試劑盒 |
tissue inhibitors of metalloproteinase 2，TIMP-2 ELISA Kit | 西尼羅病毒PCR檢測試劑盒 |
KGF ELISA Kit | Cortisol 大鼠ELISA檢測試劑盒 |
Thymus Activation Regulated Chemokine(TARC)ELISA Kit | aPT1/aPT2 鴨抗su抗體ELISA檢測試劑盒 |
tissue inhibitor of metal protease 1，TIMP-1 ELISA Kit | UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細胞異質(zhì)核糖核蛋白Q(SYNCRIP/HNRPQ/NSAP1)ELISA試劑盒 |
ai-Ku-Ab ELISA Kit | AQP-3 小鼠水通道蛋白3ELISA檢測試劑盒 |
ai exosome complex compone RRP45(EXOSC9)aibody ELISA kit | ASA 人芳基硫suan酯AELISA檢測試劑盒 |
© 2019 上海撫生實業(yè)有限公司 版權(quán)所有 備案號： 技術(shù)支持：制藥網(wǎng) GoogleSitemap 總訪問量：508507 管理登陸
在線咨詢