
空腸彎曲桿菌PCR檢測試劑盒說明書
特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產品名稱 | 空腸彎曲桿菌PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Campylobacter jejuniPCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果:
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
人細胞凋亡調整器BAX(ApoptosisregulatorBAX)ELISA試劑盒20183-47-5 20mgTenuifolin HPLC≥98% 0.312-20 ng/mL細葉遠志皂苷;細葉遠志皂甙
CD226/DNAM-1抗體,兔多抗4684-32-6HPLC≥98%A049820mg/支ELISA 鴨腳樹葉堿
ELISAKitforHumanEctonucleosidetriphosphatediphosphohydrolase114605-22-2 20mg Tauroursodeoxycholic acid 0.156-10 ng/mL牛熊去氧膽酸
IMP1/IMPA1抗體,兔多抗69884-00-0C42H72O14Pseudoginsenoside F11≥98%ELISA 擬人參皂苷F11
人白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒63-91-2 20mg L-Phenylalanine 15.6-1000 pg/mlL-苯丙氨酸
VRBG瓊脂100ml/500ml 250g姬姆薩染色液 吉姆薩染色液(即用型)
ELISAKitforHumanNuclearreceptorcoactivator110mg 0.156-10 ng/mLCENTAUREIN(RG)
3%NaC1甘露發酵管B1610774BRSSC Buffer
人血清限定性結腸癌抗原(SDCCAG3)ELISA試劑盒1g 1.56-100 ng/mL二氫月桂 DIHYDROMYRCENOL(AS)
小鼠膀胱癌細胞,MB49細胞 20mg HPLC≥98%Saikosaponin A用于含量測定1 x 10^6 cells/T25培養瓶柴胡皂苷A;柴胡皂甙A
MYL6B抗體,兔多抗,抗原親和純化10mgWB 蒜氨酸 ALLIIN(AS)
ELISAKitforAcetylcholine77-92-9 20mgCitric Acid HPLC≥98% 0.78-50 ng/mL枸櫞酸;檸檬酸
B4GALT1/GGTB2抗體,兔單抗83-67-0≥99%A042120mg/支ELISA 可可堿
人糖類抗原50(CarbohydrateAntigen50)ELISA試劑盒19057-60-4 20mg Dioscin 1.56-100 ng/mL薯蕷皂苷
沙氏葡萄糖瓊脂(USP)K-FUCOSE 250gL-巖藻糖檢測試劑盒 K-FUCOSE
ELISAKitforHumanGastrin14259-55-310mg Desacetyl asperulosidic acid 15.6-1000 pg/mL去乙酰基車葉草苷酸
空腸彎曲桿菌PCR檢測試劑盒說明書葡聚糖凝膠G-150 25g 100g Baird-Parker瓊脂基礎顆粒
纖細薯蕷皂苷 C45H72O17 Gracillin C1D抗體,兔單抗 ≥98%
游離脂肪酸定量檢測試劑盒 子起生物 硝酸鹽肉湯發酵管
咖酸 20mg Caffeic acid ELISAKitforHumanApolipoproteinA-II HPLC≥98%
氯霉素 CHLORAMPHENICOL(RG) 1g 人尾加壓素Ⅱ(UⅡ)ELISA試劑盒
紫草酸 HPLC≥98% A0690 ACY1/Aminoacylase-1抗體(FITC),兔單抗 20mg/支
Wako 021-17801 BES-So-AM 021-17801 腸道菌增菌肉湯(顆粒)
2-乙基萘 50mg 0.998 PML/RNF71/TRIM19抗體,兔多抗,抗原親和純化