
綿羊夏伯特線蟲PCR檢測試劑盒說明書
特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品名稱 | 綿羊夏伯特線蟲PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Chabertia ovinaPCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果:
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
人糖皮質激素受體(GR)ELISA試劑盒1mg 31.2-2000 pg/mLBanaba (Lagerstroemia speciosa) Leaf Extract #2 BXL(REQUEST QUOTE)
葉酸測定培養(yǎng)基/FolicAcidAssayMedium188-03151嬰兒食品和粉中葉酸測定金屬吸附催化劑系列Pd/C鈀碳
ELISAKitforHumanSestrin-35mg 0.156-10 ng/mL黃岑素-5,6,7-三 BAICALEIN-5,6,7-TRIMETHYLETHER(RG)
人腎癌細胞,OS-RC-2細胞 20mg HPLC≥98%Peucedanol用于含量測定1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶白花前胡
RBP5/retinolbinding蛋白5抗體,兔多抗,抗原親和純化25mgELISA 鼠尾草酸 CARNOSIC ACID(RG)
人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒5508-58-7 20mgNeoandrographolide HPLC≥98% 0.078-5 ng/ml新穿心蓮內酯;穿心蓮丙素,新穿心蓮素,穿心蓮新苷
CEACAM5/CD66e抗體,兔單抗 108-20-3 1mL 0.997IHC-P 異丙
ELISAKitforHumanC-X-Cmotifchemokine650-99-7100mg D(+)-Glucose 0.312-20 ng/mL無水葡萄糖
PLAUR/CD87抗體,兔多抗1126032-65-2HPLC≥98%A084110mg/支ELISA 異-羅漢果皂苷V
人白介素1受體關聯(lián)激酶3(IRAK-3)ELISA試劑盒118194-13-110mg Soyasaponin Ab 78-5000 pg/mL大豆皂苷Ab
LRP11抗體,兔多抗1124-11-4C8H12N2Ligustrazine,tetramethylprazine≥98%ELISA 川芎
ELISAKitforHumanAlpha-lactalbumin25G 0.625-40 ng/mL2-氨基聯(lián)苯[用于糖的測定] 2-Aminobiphenyl [for Sugar determination]>99.0%(GC&T)
兔造血干細胞 20mg HPLC≥98%Deoxycholic acid用于含量測定5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶去氧膽酸;脫氧膽酸
人血小板激活因子乙酰水解酶2(PAFAH2)ELISA試劑盒10mg 0.312-20 ng/mLN-乙酰-DL-纈氨酸 ACETYL-DL-VALINE, N-(P)
LM-137瓊脂/LM-137Agar膜濾法單增李氏菌的選擇性分離DPD臭氧快速測定試劑盒
ELISAKitforHumanTARDNA-bindingprotein431mg 0.78-50 ng/mL苦瓜果提取物#5 Bitter Melon-Indochinese (Momordica charantia) Fruit Extract #5 BXL(REQUEST QUOTE)
綿羊夏伯特線蟲PCR檢測試劑盒說明書番瀉苷元B HPLC≥98% A0583 CD80/B7-1抗體,兔多抗 20mg/支
磷酸鹽類增塑劑512-56-1、115-86-6 208-06906 制霉菌素檢定培養(yǎng)基/NystatinMedium
馬錢子寧;毒鼠堿;番木鰲堿 HPLC≥98% Strychnine 兔肝kuffer細胞 用于含量測定
橄欖苦苷 20mg Oleuropein ELISAKitforHumanC-Cmotifchemokine22
DIVINYL-PROTOCHLOROPHYLLIDE (SH) 2.5ml ELISAKitforHumanCDP-diacylglycerol--glycerol-3-phosphate3-phosphatidyltransferase,mitochondrial
玉米黃質測定試劑盒 ZEAXANTHIN METHOD VERIFICATION KIT(P) 1 Kit ADAM17/CD156b抗體,兔多抗,抗原親和純化
Wako 196-13401動物疾病造模試劑 196-13401 胰化大豆硫酸鎂瓊脂(TSAM)
靈芝酸D HPLC≥98% Ganoderenic acid D 人結腸直腸腺癌細胞,NCI-H508細胞 用于含量測定