
艾美耳球蟲屬通用PCR檢測試劑盒供應商
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
產品名稱 | 艾美耳球蟲屬通用PCR檢測試劑盒供應商 |
英文名稱 | Eimeria spp.PCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果:
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。
細小病毒(PPV)核酸檢測試劑盒77690-92-7 20mg6'''-Feruloylspinosin HPLC≥98% 15.6-1000 pg/mL6'''-阿魏酰斯皮諾素
RNF11抗體,兔多抗,抗原親和純化 1634-04-4 5mL 0.998IHC-P 基叔丁基
ELISAKitforHumanClaudin-2480-41-1 20mgNaringenin HPLC≥98% 15.6-1000 pg/mL柚皮素;4'',5,7-三羥基黃;;柚皮苷元;柑橘素
ApoA1抗體,鼠單抗63238-66-4HPLC≥98%A063320mg/支WB IF ICC/IF 苯酰次烏頭原堿
CystatinD/CST5抗體,兔單抗51330-27-9A0714ELISA 大豆皂苷Bb
BTN3A3抗體,兔多抗,抗原親和純化518-34-3C38H42N2O6d-Tetrandrine≥98%ELISA 漢防己素
ELISAKitforHumanLactotransferrin25ML 0.78-50 ng/mL2-芐基啶 2-Benzylpyridine >98.0%(GC&T)
葡萄球菌選擇性瓊脂48樣 250g血糖含量檢測試劑盒(科研)
人朊病毒樣蛋白doppel(Prion-likeproteindoppel)ELISA試劑盒5mg 0.156-10 ng/mLDESGLUCORUSCIN(P)
麥康凱瓊脂平板/MacCAgarPlate357-11912大腸菌群及大腸桿菌分離357-11912 QuadraSil?MP
ELISAKitforHumanSphingosine1-phosphatereceptor225mg 0.625-40 ng/mL樺木酸酯 BETULINIC ACID METHYL ESTER(AS)
VCAM-1/CD106抗體,兔多抗 132-64-9 10mg 0.997ELISA 二苯并呋
Thioredoxin/TXN抗體,兔多抗,抗原親和純化10mgELISA WB IP 香檸檬 BERGAPTEN(SH)
膽固(Cholesterol)ELISA試劑盒141433-60-5 20mgBerberine hydrochloride HPLC≥98% 7.8-500 pg/mL鹽酸小檗堿;鹽酸黃連素
CD3e/CD3epsilon抗體,鼠單抗15291-76-6HPLC≥98%A016520mg/支FCM 銀杏內酯C
ELISAKitforHumanCaspase-9490-67-510mg Gaultherin 0.78-50 ng/mL冬綠苷
艾美耳球蟲屬通用PCR檢測試劑盒供應商N-乙酰芐胺 N-Benzylacetamide >98.0%(GC) 25G ELISAKitforHumanProgesteronereceptor
輔酶B12/腺苷鈷胺 ADENOSYLCOBALAMINE(COENZYME B12)(AS) 25mg ELISAKitforHumanSecretin
原兒茶 20mg Protocatechualdehyde 人組織蛋白酶S(Cath-S)ELISA試劑盒
9004-54-0 Dextran 聚合物標準品 9004-54-0 山梨麥康凱瓊脂基礎/山梨麥康克瓊脂基礎/SMAC
絡塞定 20mg Rosiridin ELISAKitforHumanApolipoproteinC-II HPLC≥98%
1-丁硫 1-Butanethiol >97.0%(GC) 500ML ELISAKitforHumanLIMhomeoboxtranscriptionfactor1-beta
可替寧 COTININE(RG) 10mg 人Toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒
(刺五加苷B) TransferrinReceptor/TFRC/CD71抗體,兔單抗